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凝膠滲透色譜柱在蛋白質(zhì)分析中的重要應(yīng)用說明
更新時(shí)間：2025-01-14 點(diǎn)擊次數(shù)：152
一、蛋白質(zhì)分離與純化 凝膠滲透色譜柱是蛋白質(zhì)分離和純化的有力工具。在復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物中，蛋白質(zhì)分子大小各異。凝膠柱中的凝膠顆粒具有特定的孔徑，大分子蛋白質(zhì)由于分子量大、體積大，只能被排阻在凝膠顆粒之外，在顆粒間的空隙間隨流動相快速流動；而小分子蛋白質(zhì)則能夠擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，在顆粒內(nèi)的孔隙中穿行，從而與流動相產(chǎn)生不同的相對運(yùn)動速度。這就使得不同大小的蛋白質(zhì)在經(jīng)過時(shí)被逐步分離。這種基于分子大小的分離方式無需復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)或特殊的相互作用條件，操作相對簡便。
二、蛋白質(zhì)分子量測定
可用于測定蛋白質(zhì)的分子量。根據(jù)分子量大小與在柱上的洗脫順序之間的關(guān)系，可以建立一個標(biāo)準(zhǔn)曲線。將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)在相同的凝膠滲透色譜條件下進(jìn)行分析，記錄它們的洗脫體積；然后將待測蛋白質(zhì)進(jìn)行同樣的分析，通過對比其洗脫體積與標(biāo)準(zhǔn)曲線，就能夠估算出待測蛋白質(zhì)的分子量。
三、蛋白質(zhì)純度評估
在蛋白質(zhì)純化過程中，可以清晰地展現(xiàn)出蛋白質(zhì)樣品中的雜質(zhì)情況。如果樣品中存在少量與其他主蛋白分子量相近的雜質(zhì)蛋白，雖然凝膠滲透色譜柱可能無法將它們與主蛋白分離，但仍然可以通過觀察洗脫峰的形狀、是否有拖尾或者額外的小峰等情況，來初步判斷蛋白質(zhì)樣品的純度。
四、蛋白質(zhì)低聚性分析
還可用于分析蛋白質(zhì)的低聚性。如果蛋白質(zhì)以低聚體形式存在，不同低聚體的分子量存在差異，在通過時(shí)，會按照分子量大小依次被洗脫出來，從而可以確定蛋白質(zhì)的低聚體組成情況。
五、蛋白質(zhì)與其他化合物相互作用研究
在研究蛋白質(zhì)與其他小分子或大分子的相互作用時(shí)，將它們的共混溶液通過凝膠滲透色譜柱。若存在相互作用，會使蛋白質(zhì)的保留時(shí)間發(fā)生改變，通過分析這種改變情況，可以評估它們之間的相互作用強(qiáng)度、親和性和配合比例等信息。
